在龐大的維生素家族中,最為人所熟悉的恐怕就是維生素C了。
作為人體必需的維生素之一,維生素C因其具有的超強(qiáng)抗氧化能力、自由基清除能力和其它相關(guān)生理功能,被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化妝品和飼料等各個(gè)領(lǐng)域。據(jù)統(tǒng)計(jì),全球每年的維生素C需求量約為22萬(wàn)噸,超過(guò)其它所有維生素類產(chǎn)品的總和,而且還在以每年10%左右的增速持續(xù)增長(zhǎng)。
然而很多人并不清楚的是,擁有著最大“群眾基礎(chǔ)”的維生素C,其合成工藝卻幾乎是同類型維生素中最復(fù)雜的。這一缺陷也在很大程度上制約了維生素C產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。
對(duì)此,江南大學(xué)未來(lái)食品科學(xué)中心陳堅(jiān)院士團(tuán)隊(duì)教授周景文課題組歷經(jīng)十余年的刻苦攻關(guān),在維生素C的一步合成工藝開發(fā)方面獲得重要研究進(jìn)展,相關(guān)研究為維生素C一步發(fā)酵工藝的實(shí)現(xiàn)提供了元件和方向,為大幅度降低維生素C生產(chǎn)過(guò)程中的能耗和成本奠定了重要的基礎(chǔ)。
日前,相關(guān)研究分別發(fā)表于《先進(jìn)科學(xué)》和《生物資源技術(shù)》。
最常見的維生素,源于最復(fù)雜的方法
與很多維生素不同,維生素C雖然是人體所必需的微量元素,但人體并不能自然合成,只能通過(guò)外部攝取。然而,過(guò)于活躍的化學(xué)性質(zhì)又導(dǎo)致維生素C無(wú)法長(zhǎng)期穩(wěn)定地存在于復(fù)雜的液體環(huán)境中。
“正因如此,工業(yè)上都是以合成維生素C的前體物質(zhì)——2-酮基-L-古龍酸的方式,實(shí)現(xiàn)維生素C的大規(guī)模生產(chǎn)?!敝芫拔母嬖V《中國(guó)科學(xué)報(bào)》,但即便是合成這種物質(zhì),過(guò)程也十分復(fù)雜。
目前,2-酮基-L-古龍酸的通常合成程序被稱為“三菌兩步法”,即首先在山梨醇培養(yǎng)基中加入特定種類的發(fā)酵微生物,使其發(fā)酵成為山梨糖。然后在其中加入兩種其他的發(fā)酵微生物,通過(guò)這種“混菌”的發(fā)酵體系,使山梨糖轉(zhuǎn)化成為2-酮基-L-古龍酸。
“之所以不能將3種發(fā)酵菌同時(shí)加入山梨醇培養(yǎng)基中,是因?yàn)楹髢煞N發(fā)酵微生物不僅可以和山梨糖發(fā)生反應(yīng),也會(huì)和山梨醇發(fā)生反應(yīng)并生成其他物質(zhì)。這就會(huì)大大降低發(fā)酵效率。”周景文課題組成員、江南大學(xué)未來(lái)食品科學(xué)中心博士后秦志杰解釋說(shuō)。
然而,增加了額外的發(fā)酵步驟同樣會(huì)降低維生素C的合成效率,提升合成成本。周景文說(shuō),比如每次加入不同發(fā)酵微生物之前,都需要對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行高溫滅菌,這意味著需要在很短時(shí)間內(nèi)將發(fā)酵液加溫至121攝氏度,同時(shí)又需要在很短時(shí)間內(nèi),對(duì)高溫滅菌后的發(fā)酵液進(jìn)行降溫?!斑@是一個(gè)既耗時(shí)、又耗能、又耗錢的過(guò)程?!?span style="display:none">vXg即熱新聞——關(guān)注每天科技社會(huì)生活新變化gihot.com
此外,在此過(guò)程中還需要將一兩百噸的發(fā)酵液從一個(gè)儲(chǔ)藏罐中轉(zhuǎn)到另外一個(gè)罐中,單單這一過(guò)程就需要耗費(fèi)好幾個(gè)小時(shí)。
“據(jù)我所知,除維生素C外的其他維生素的生物合成過(guò)程,幾乎都可以做到‘一菌一步’,但只有維生素C這種最常見的維生素,卻只能用最復(fù)雜的發(fā)酵方法制作?!敝芫拔恼f(shuō)。
實(shí)現(xiàn)“一菌一步”
維生素C復(fù)雜合成工藝背后所存在的原理性障礙,早在上世紀(jì)90年代便已經(jīng)為業(yè)內(nèi)所熟知,但多年來(lái)卻始終未被攻破。“以至于如果有誰(shuí)宣稱成功完成了維生素C的‘一菌一步’發(fā)酵,大概率會(huì)被認(rèn)為是騙子?!敝芫拔男χf(shuō)。
然而從2006年開始,經(jīng)過(guò)十幾年的努力,周景文團(tuán)隊(duì)卻實(shí)打?qū)嵉貙?shí)現(xiàn)了這一目標(biāo)。
在研究中,該團(tuán)隊(duì)以氧化葡萄糖酸桿菌為底盤菌株,通過(guò)引入山梨酮脫氫酶與山梨糖脫氫酶,成功構(gòu)建出可以直接利用山梨醇一步發(fā)酵合成2-酮基-L-古龍酸的工程菌株,在這種工藝下,每升山梨醇溶液在168小時(shí)內(nèi)可以生產(chǎn)出61.8克2-酮基-L-古龍酸。
同時(shí),該團(tuán)隊(duì)還利用結(jié)構(gòu)生物學(xué),解析了山梨醇發(fā)酵過(guò)程中的關(guān)鍵限速酶——山梨酮脫氫酶的催化機(jī)制,并提升了它的活性,該成果也為一步發(fā)酵維生素C提供了優(yōu)良的酶元件。
為了更快地解決維生素C一步合成問(wèn)題,課題組同時(shí)對(duì)以葡萄糖為底物的單菌一步發(fā)酵合成維生素C途徑進(jìn)行了研究。
“合成2-酮基-L-古龍酸的最初原料——山梨醇是通過(guò)葡萄糖轉(zhuǎn)化獲得的。我們的這項(xiàng)研究旨在通過(guò)研發(fā)新型維生素C合成工藝,省略‘合成山梨醇’這一步,實(shí)現(xiàn)從葡萄糖到2-酮基-L-古龍酸的直接轉(zhuǎn)化?!鼻刂窘苷f(shuō),目前他們已經(jīng)可以實(shí)現(xiàn)在5升的葡萄糖發(fā)酵罐內(nèi),在62小時(shí)內(nèi)使2-酮基-L-古龍酸產(chǎn)量達(dá)到30.6克/升,葡萄糖轉(zhuǎn)化率達(dá)到40%。
理應(yīng)把握的“先機(jī)”
雖然已經(jīng)在維生素C合成領(lǐng)域取得了令人矚目的成果,但周景文團(tuán)隊(duì)的研究并沒有停止,他們目前研究的一個(gè)重點(diǎn)方向是該項(xiàng)成果的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。
“作為世界上需求量最大的維生素,僅僅在酸味劑領(lǐng)域,維生素C便已經(jīng)是僅次于檸檬酸的第二大酸味劑原料,其應(yīng)用領(lǐng)域之廣泛由此可見一斑?!敝芫拔恼f(shuō)。
據(jù)海關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),僅2023年8月,我國(guó)維生素C的出口量就達(dá)到14475.5噸,同比增20%。
“維生素C的生產(chǎn)還牽扯大量上下游產(chǎn)業(yè)鏈企業(yè)。這就意味著如果不是我們,而是其他國(guó)家在維生素C合成領(lǐng)域取得突破,并大大壓縮相關(guān)生產(chǎn)成本,我們的產(chǎn)業(yè)必將受到非常嚴(yán)重的影響?!敝芫拔恼f(shuō),根據(jù)估算,如果他們的成果進(jìn)一步提升效率并最終產(chǎn)業(yè)化,將有可能使維生素C的制備成本降低50%。
值得一提的是,雖然目前維生素C的應(yīng)用領(lǐng)域已經(jīng)十分廣泛,但如果制備成本大幅度下降,其應(yīng)用范圍仍可以繼續(xù)擴(kuò)展。
以賴氨酸為例,周景文介紹說(shuō),在其生產(chǎn)效率不高時(shí),人們往往會(huì)選擇直接將其攝入到體內(nèi),但隨著賴氨酸生產(chǎn)效率的提升,人們開始轉(zhuǎn)而將其加入到動(dòng)物飼料中,并通過(guò)食用相關(guān)動(dòng)物制品的方式補(bǔ)充賴氨酸。
“同樣的道理,如果維生素C的生產(chǎn)效率和產(chǎn)量大幅度提升,其使用范圍也可能會(huì)擴(kuò)展至水產(chǎn)、養(yǎng)殖等領(lǐng)域?!敝芫拔恼f(shuō),在這方面我們應(yīng)把握先機(jī)。
相關(guān)論文鏈接:https://doi.org/10.1002/advs.202301955
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